技术分享多糖相对分子质量测定方法

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相对分子质量与相对分子质量分布是表征多糖结构的重要指标,并与多糖活性密切相关。表示其相对分子质量大小的方式有重均相对分子质量(Mw),数均相对分子质量(Mn),黏均相对分子质量(Mg)和Z均相对分子质量(Mz)。可用于多糖相对分子质量检测的方法有黏度法、超离心法、渗透压法、凝胶电泳法、质谱法、分子排阻色谱法(HPGPC)和分子排阻色谱-多角度激光散射法(SEC-MALS)等,其中近些年最常用的是HPGPC法及SEC-MALS法。

HPGPC法

根据在凝胶柱上不同相对分子质量的多糖与洗脱保留时间(tR)成一定关系的特性,先用5或6个已知相对分子质量的标样制成标准曲线,然后由样品的tR从曲线中求得相对分子质量。HPGPC法作为一种相对分子质量测定法,对照品与样品的结构相似性对于结果有很大影响,有时需经过普适校正来获得准确结果。常用的多糖分子量对照品有右旋糖酐分子量标准套(中国食品药品检定研究院,分子量范围~)、不同范围的普鲁兰多糖分子量标准品(~)、羟乙基纤维素分子量对照品(~)等。

图1:HPGPC法试验原理

SEC-MALLS法

SEC-MALLS法测定分子量原理是当激光照射到样品时,会在各个方向产生散射光,在任何方向的光散射强度与相对分子质量和溶液的浓度成正比。SEC-MALLS法是一种相对分子质量测定的绝对方法,不依赖于标准物质,无需做校正曲线,且可获得样品在溶液状态下的部分构象信息。

dn/dc(SpecificRefractiveIndexIncrement,绝对折射率增量)用于描述聚合物溶液折光指数相对于溶质浓度的变化,是光散射方程中常数K中重要参数,只有精确测定该值,才能根据光散射信号计算高分子摩尔质量。尽管PolymerHandbook、Huglin、



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